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Übung Grundlagen der Biochemie

Praktische Aspekte und Biochemische Arbeitsmethoden, 1SWS, Sommersemester

Dr. Daniel Wohlwend

In dieser Veranstaltung werden die praktischen Aspekte biochemischen Arbeitens in Vorbereitung auf das Biochemische Grundpraktikum eingeführt und diskutiert.

 

 

Inhalt

 

1. Puffer in der Biochemie - Einsatzgebiete, Eigenschaften von Puffern, Pufferzusammensetzung (Puffer, Salze, Additive, Reduktionsmittel, Proteaseinhibitoren, Detergentien)

2. Rekombinante GenexpressionGebräuchliche Prokaryontenstämme und Wachstumsbedingungen, Sterilisationsmethoden, Medien, Wachstumskurven

3. GelelektrophoreseSDS-PAGE, BN-PAGE, IEF, 2D-Gelelektrophorese

4. ProteinbestimmungsmethodenAbsolute Quantifizierung (Ninhydrin, Gravimetrie), Kolorimetrie (Bradford, BCA, Lowry, Biuret), Spektroskopie (Gill & von Hippel)

5. Proteinpräparation I: Einführung - Eigenschaften von Proteinen (Größe, Faltung, elektrostatisches Oberflächenpotential, Lokalisierungssignale), Präparationsstrategien, Zellaufschlußmethoden, Zentrifugation, Dichtegradientenzentrifugation

6. Proteinpräparation II: Techniken ohne Chromatographie - Ammoniumsulfatfällung, Denaturierung/Renaturierung, Dialyse

7. Chromatographie I: AffinitätschromatographieIMAC, GSH-Sepharose, StrepTactin

8. Chromatographie II: Elektrostatische TrennmethodenAuflösung in der Chromatographie,  Ionenaustauschchromatographie (IEX), Hydrophobe Interaktionschromatographie (HIC), HPLC

9. Chromatographie III: Gelfiltrationstechniken - Entsalzung, SEC, Statische und dynamische Lichtstreuung

10. Proteinanalytik I: Spektroskopie - UV-vis-Spektroskopie, Fluoreszenzspektroskopie

11. Proteinanalytik II: Massenspektrometrie - Massenspektrometriemethoden, Mass finger prints, Peptidanalytik

12. Proteinanalytik III: Charakterisierung von Interaktionen - Thermodynamik von Protein-Liganden-Interaktionen, SPR, ITC

 

 

by webmaster biochemie last modified Jan 21, 2014 01:44 PM
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